Técnica de Western blot

O Western blot é uma técnica utilizada na biologia molecular e na bioquímica para detectar proteínas em um homogenato ou em um extrato de tecido biológico.

Primeiramente, a técnica consiste em uma eletroforese unidimensional que separa as proteínas da amostra, de acordo com a massa molecular. Ao final, ocorre a transferência para uma membrana, sob aplicação de um campo elétrico em tampão básico, onde as proteínas se ligam à membrana por meio de interações hidrofóbicas.

As membranas mais utilizadas são as de nitrocelulose (menor custo) e PVDF (mais sensível e com maior capacidade de ligação com as proteínas e tempo de retenção destas), que sofrem bloqueio para inibição de ligação inespecífica entre os anticorpos a serem utilizados. Em seguida, adiciona-se o anticorpo primário seguido do anticorpo secundário complexado com uma enzima reveladora.

Quando há transferência de um extrato proteico para uma membrana de nitrocelulose, denomina-se Western blot. Entretanto, quando após a transferência das proteínas ocorre a sua identificação por meio de anticorpos, denomina-se Immunoblot

O immunoblotting limita-se a uma análise semi-quantitativa (eventualmente quantitativa) da proteína, pois não permite estimar a funcionalidade desta última.

Os principais tipos de detecção do sinal do western blotting após a adição do anticorpo primário são: colorimétrica, quimioluminescente, radioativa e fluorescente.

Veja no vídeo abaixo mais alguns detalhes sobre a técnica:


Referências: 

MADRUGA, C. R.; ARAÚJO, F. R.; SOARES, C. O. Imunodiagnóstico em Medicina Veterinária, Embrapa Gado de Corte:Campo Grande, 360 p., 2001.

MORAES, C. S.; OLIVEIRA JUNIOR, F. O. R.; MASSON, G.; REBELLO, K. M.; SANTOS, L. O.; BASTOS, N. F. P.; FARIA, R. C. R. Série em Biologia Celular e Molecular Métodos Experimentais no Estudo de Proteínas, IOC: Rio de Janeiro, 84 p., 2013.

 

Juliana Dalbó

Juliana Dalbó

Biomédica, formada pela UNES - Faculdade do Espírito Santo, com especialização em Gestão em Saúde Pública e Meio Ambiente pela Universidade Cândido Mendes - UCAM. Atualmente cursa doutorado em Biotecnologia na Universidade do Espírito Santo pela RENORBIO - Rede Nordeste de Biotecnologia.
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Juliana Dalbó

Biomédica, formada pela UNES - Faculdade do Espírito Santo, com especialização em Gestão em Saúde Pública e Meio Ambiente pela Universidade Cândido Mendes - UCAM. Atualmente cursa doutorado em Biotecnologia na Universidade do Espírito Santo pela RENORBIO - Rede Nordeste de Biotecnologia.

  • Ciências Biológicas UENP

    Muito bom! Seria muito interessante e de grande ajuda se vocês também explicassem a técnica Southern blot com vídeo! Voltado para pessoas que não sabem nada ou como eu que ainda tem dificuldades para entender!

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